Ставане с комуна Schizophyllum: Създайте стерилна култура от намерените гъби: 3 стъпки (със снимки)

2024 Автор: John Day | [email protected]. Последно модифициран: 2024-01-30 07:54

Тази инструкция е фокусирана върху обясняването как да се създаде стерилна култура на гъбата Schizophyllum Commune (общо наименование гъба Split Gill) върху чиния Петри с помощта на намерени гъби. Установено е, че комуната Schizophyllum има над 28 000 пола, може да се намери на всички континенти, с изключение на Антарктида, и има способността (подобно на други „гъби с бяло и кафяво гниене“) да разгражда замърсяването, нарушаващо ендокринната система (пластмаси, имитиращи хормони, промишлени нефтохимикали като тор Атразин, пластификатор Бисфенол-А или синтетичен хормон Диетилстилбестрол).

Ще разгледам техниките за идентифициране на диви гъби, как да си приготвя хранителен съд с агаров петри и как да използвам намерените ви гъби за отглеждане на стерилна изолирана култура във вашия съд Петри. Други инструкции от тази поредица преминават през техники като генетична идентификация на гъби, прости ензимни анализи за тестване на способността на гъбата да разгражда пластмаси и имитиращи хормони замърсявания и как да се прави сирене със S. Commune.

Този проект излезе от съвместната работа на Mary Maggic, Paula Pin и аз по време на резиденция в HANGAR в Барселона, Испания, есента на 2018 г. За повече информация относно проекта прочетете на ~~ или прескочете всички Bla Bla и отидете направо на Step 1 за урока:)

Изображенията са от Fanzine на Schizophyllum Commune ~ файловете могат да бъдат изтеглени безплатно тук

По време на резиденцията нашите три основни цели бяха:

1 ~ Проучете и разгледайте научната литература за комуна Шизофил и нейните различни взаимодействия с хормони и нарушаващи ендокринната система нефтохимични замърсители. S. Commune е една от многото гъбички с "бяло и кафяво гниене", които имат способността да разграждат хормонално и ендокринно нарушаващо замърсяването. Тези гъби се хранят от дървета, като отделят „лигноцелулозни“ензими от техните мрежови тела или „мицелия“и ензимите са в състояние да разграждат целулозата и лигнина, от който са направени дърветата. Поради структурни прилики между целулоза, лигнин и EDS ' / хормони като атразин, BPA, естрадиол, диетилстилбестрол и ненилфеноли, "лигноцелулозните" ензими, секретирани от гъбите, също могат да разграждат голямо разнообразие от токсични вещества. В допълнение към това, S. Commune произвежда имуностимулиращи полизахариди, които са полезни като профилактика и лечение на рак (одобрен в Япония за лечение на рак на шийката на матката), могат да подобрят фитоестрогенните свойства на някои растения чрез ферментация, могат да се използват вместо сирище и лактобацилис при процеси на производство на сирене и произвеждат ензими, разтварящи тромбиновия съсирек (полезни при лечение на тромбоза). Странно е, че същите тези "бета-глюкани", които могат да бъдат извлечени с вряща вода като лечение на рак и имуностимуланти, също се използват от петролната промишленост за повишаване на добивите на петрол, обвързвайки S. Commune в бизарска обратна връзка с производството на нарушаващи ендокринната система нефтохимикали той е в състояние да се разгради и възстанови.

2 ~ Разработете DIY и DIWO (направете го с други) протоколи, които опростяват тези рецепти за работа с EDC и гъбички за превеждане на кодифицирани научни знания на език, който е по -достъпен. Използвайте тези рецепти за образование, за разпит, за съпротива срещу молекулярни колонизации и създаване на нови разкази за възникването на многовидове и нашата колективна мутагенеза.

3 ~ Предизвикайте доминиращия цишетеронормативен, странен дискурс около ендокринните разрушаващи химикали (EDC's). За да цитирам стипендията на Малин Ах-Кинг и Ева Хейуърд по въпросите: „Много новини съобщават за тези плашещи ендокринни приказки от задните ни дворове. В опит да изтъкнат тези проблеми-както ще опишем в следващите-медиите излъчиха една метаморфоза на Франкенщайн което заплашва секса и сексуалността. Вместо да се справят с много други рискове за здравето, свързани с експозицията на токсични вещества, най-сензационните и полемични въпроси застават за дебат и критичен отговор. Той повдига въпроси: Защо сексът е по-централен от рака, автоимунното заболяване, и дори смърт? Какви културни нерви (много от които са глобализирани) се задействат? И, за тези от нас с феминистки притеснения, как да преориентираме дебата далеч от есенциализма, сексизма и хетеронормативността? (Токсични полове).

Schizophyllum Commune е уникална "гъба с бяло гниене", тъй като е установено, че има над 28 000 генетични пола. Тази теория, много теоретизирана адаптация, позволи невероятното генетично разнообразие на този вид, което съществува на всеки континент по света, с изключение на Антарктида. Искахме да отпразнуваме красивата сексуална множественост на този организъм като един пример за странността на биологията. Доминиращият дискурс около EDC в медиите и дори от екологичните активисти се фокусира силно върху ненаучни разкази, че тези молекули причиняват определени сексуалности или полове, които нашето общество патологизира, етикетира ненормативни и често се стреми да премахне или избегне. Паническият, странно фобичен фокус на публичния протест не само е научно нереалистичен (хормоните и ендокринните разрушители не правят хората странни или транс), но пренебрегва всички опустошително реални ефекти, които можем да свържем с EDC: затлъстяването, нарушения на щитовидната жлеза, някои видове рак, наред с други рискове за здравето.

Стъпка 1: Намерете комуна Шизофилум, живееща във вашата общност

Лабораторни стерилни култури от Schizophyllum Commune могат да бъдат закупени за около 350 долара от банка за микробиологични култури като ATCC … поради което избрахме безплатно култивиране от диви гъби:)

Стана ми лесно, защото четох за комуна Шизофилум и един ден случайно забелязах как расте на дърво пред апартамента ми. Ако нямате такъв късмет случайно да се натъкнете на S. Commune във вашия квартал, ще искате да отидете в гористи местности, за да потърсите гъби „скоба“, растящи върху болезнено дървета от твърда дървесина (дървета, които изглеждат така, сякаш не го правят твърде добре) или паднали дървета. S. Commune е една от най -често срещаните съществуващи гъбички по света и може да бъде намерена основно навсякъде, където има твърда дървесина за отглеждане.

Mushroomobserver.org предоставя подробно подробно описание къде и кога е вероятно да намерите S. Commune, както и как да го идентифицирате и как да избегнете „приличане“, което може да доведе до погрешно идентифициране:

ИДЕНТИФИКАЦИЯ: Общината на Schizophyllum лесно се идентифицира по разцепените си хриле, гъстата коса и шапката във формата на ветрило. Капачката е широка 1-4,5 см и обикновено има форма на черупка или ветрило със сива до белезникава повърхност. Базидиоспорите са 5-7,5 × 2 -3 микрометра. Подобна гъба, известна като „Кримпилената хриля“Plicaturopsis crispa, не е толкова широко разпространена.

ХАБИТАТ: Комуната Schizophyllum расте върху твърда дървесина, използвайки ензими за разграждане на лигнина и причинява „бяло гниене“. Така че се среща в почти всички гористи райони. Може да се намери целогодишно поради способността му да изсъхва, да се рехидратира при по -добри условия и след това да продължи да спорира.

Тази гъба може да бъде паразитна на дървета с малък диаметър, които са подложени на стрес от други фактори, като суша.

ПОГЛЕДАЙТЕ ПАРИЧНО: Plicaturopsis crispa или „кримпващата хриля“е подобна на разцепената хриля. Също така има плодово тяло с форма на черупка/ветрило. Капачката обаче е червеникавокафява или жълтокафява, а долната страна е много отличителна. Той има нагънати вени като хриле, които са много по -различни от разцепените хриле на Schizophyllum commune. Нагънатата хриля е по -рядко срещана, но отличителна, когато бъде намерена."

Стъпка 2: Направете хранителни агарни плочи за S. Commune да растат

За да изолирате културата на S. Commune, която сте открили, ще ви трябват някои чинии Петри, пълни с храна за гъбата. Екстрактът от малц Агар е лесна за приготвяне храна за S. Commune или "хранителни среди", които могат да бъдат направени с лесно достъпни съставки. Също така е добър източник на храна, който да използвате, когато правите експерименти с ензимен анализ с S. Commune и други гъби с бяло или кафяво гниене ~~ този процес ще бъде разгледан в друга инструкция.

СТРАНИЧНА ЗАБЕЛЕЖКА: Ако сте имали проблеми с намирането на S. Commune, има много други гъбички в едно и също семейство, които могат да се култивират, използвайки същите процеси и са също толкова добри, ако не и по -добри за разграждане на замърсителите, нарушаващи ендокринната система. Турската опашка (Trametes Versicolor) е открита в много проучвания, които разглеждат стотици гъби с бяло и кафяво гниене като най -големите производители на „лигноцелулозните“ензими, които разграждат петрохимичното замърсяване. Стридите също са много добри в това.

Правя микробиологичната си работа в лаборатория по биология на общността, наречена BUGSS (Baltimore Underground Science Space), където имам достъп до стъклени съдове, цифрови везни, градуирани цилиндри, автоклав (за стерилизация на носители с топлина и налягане) и т.н. се появи по целия свят през последното десетилетие, така че може да искате да проверите този списък, за да видите дали има такъв близо до вас. Ако нямате страхотна общностна лаборатория като тази във вашия район, ще трябва да инвестирате в основно оборудване за този процес, като например:

1 ~ Цифрова скала за прецизно измерване на вашите съставки

2 ~ Тенджера под налягане за стерилизиране на вашата среда с топлина и пара

3 ~ Петри, могат да бъдат закупени онлайн доста евтино, стъкло за многократна употреба или пластмаса за еднократна употреба ще работят, но повторната употреба винаги е по-добра:)

4 ~ Някои стъклени съдове за смесване на вашите съставки, стерилизиране и съхранение.

Ако не искате да инвестирате в това оборудване, можете да намерите предварително налити агарни плочи с екстракт от малцов екстракт, които да закупите на уебсайтове като Amazon ~ ще бъде по-скъпо в дългосрочен план, ако планирате да продължите да извършвате микробиологична работа.

Вече има много страхотни ръководства и видеоклипове в YouTube за това как да направите свои собствени хранителни среди за домашни любимци. Така че, вместо да навлизам в подробности по този въпрос, просто ще се свържа с няколко - и ще дам рецептата за 2% малцов екстракт от агар, който е хранителната среда, която ще използвате.

Пресни гъби: Ръководство за това как да направите плочи от агар за отглеждане на гъби у дома

Mykoweb: Първи стъпки с отглеждането на гъби

Технически лист с екстракт от малцов екстракт от малц

2% малцов екстракт от агар (MEA) ~~ Рецепта за 1 литър:

20 г малцов екстракт (обикновена доставка за бира, може да се закупи онлайн)

15 г агар (втвърдяващ агент - това се използва за готвене често, така че може да бъде закупен онлайн или в някои хранителни магазини)

1 литър H20 (обикновено използвам вода с обратна осмоза, която може да се закупи в повечето магазини за хранителни стоки в кани за галони)

Тази рецепта може лесно да бъде променена, ако искате да направите по -малки количества. Често например правя само 250 мл наведнъж, така че в крайна сметка използвам само 5 грама малцов екстракт, 3,75 грама агар и 250 мл вода.

Стъпка 3: Инокулирайте ястието си Петри с гъбички

Гъбата, която виждате, се нарича „плодно тяло“, тя е само малка част от организма. По -голямата част от тялото му е скрито в дървото (или в земята), като поглъща дървесината. Тази част от гъбата се нарича мицел. За да култивирате бялото нишковидно, пипало, ризоматично, мицелиално тяло на Schizophyllum Commune върху чиния на Петри, ще вземете проба от стъблото, ще стерилизирате и поставите върху вашите MEA чинии. Мицелът ще расте от стерилизираната проба от сърцевината на гъбното стъбло и ще колонизира петриевата чиния, приличаща на бяла памучна постелка.

Ще имаш нужда:

• Плочите с агар от екстракт от малц (MEA), които сте приготвили в предишната стъпка
• 70% изопропилов алкохол (алкохол за триене) и бутилка със спрей
• Хартиени кърпи
• Скалпел или просто самобръсначка от неръждаема стомана - кутия за рязане ще работи
• метална пинсета
• ръкавици
• Пламък - Използвам алкохолна лампа за стерилизация на инструменти, NonDisjunction има чудесен урок за това как да го направите тук.
• Стерилна повърхност за рязане (току -що използвах стерилна чиния Петри за това)
• Парафилм, парафинов филм, използван за запечатване на петриеви чаши - можете също да използвате само маскираща лента, ако нямате тази

СТЕРИЛНА ТЕХНИКА:

Основното нещо, което искате да имате предвид, когато се опитвате да използвате стерилна техника, е, че бактериите и спорите непрекъснато падат във въздуха, така че искате да държите петриевите си чаши покрити колкото е възможно повече. Когато вдигате капаците, за да излеете среда, или инокулирате, винаги е най -добре да държите капака точно над съда, което ви позволява да имате достъп до вътрешността хоризонтално, но като държите капака над съда, за да предотвратите навлизането на бактерии. На второ място, вие са гигантски конгломерат от човешки, бактериални, гъбични и други организми ~~ въпреки че не можете да го видите, вие сте заобиколени от плътен облак от микроби, които се разпространяват от тялото ви. Вместо просто да седите на повърхността на кожата си, вашият микробиом се простира във въздуха ~~ ооооооо, никога не махайте с ръце над чашата на Петри, нито се навеждайте над отворената чиния, за да погледнете. И носете ръкавици, ако имаш ги;)

НАСТРОЙТЕ ВАШЕТО ПОЛУСТЕРИЛНО РАБОТНО ПРОСТРАНСТВО

Изберете непореста работна повърхност, чиста от отломки и боклуци. Напръскайте зоната надолу със своя 70% разтвор на изопропилов алкохол и я избършете с хартиена кърпа. Поставете пламъка си в центъра на работната зона и го запалете. Вие ще искате да работите възможно най -близо до пламъка, защото той създава малко стерилно поле около него. Поставете вашите MEA плочи от едната страна, а пробата от гъби върху стерилна режеща повърхност от другата страна. Обикновено използвам стерилна чаша Петри като стерилна режеща повърхност, както и подложка за инструменти. Изсипете малко изопропилов алкохол в малка чаша - ще използвате това, за да стерилизирате острието и пинсетите си по време на работа.

*¡~ ИНОКУЛИРАЙТЕ ~!*

Преди да предприемете каквото и да било, стерилизирайте острието и пинсетата си, като ги потопите в изопропиловата алча и след това ги задържите малко над пламъка. След стерилизация ги поставете върху стерилната си режеща повърхност, ако ги поставите. С помощта на пинсета задръжте стъблото на гъбата и отрежете парче от края му. Вземете това парче и изрежете всички страни, така че в крайна сметка да получите малко кубче от сърцевината на гъбното стъбло с отстранени всички външни повърхности. Това помага да се отървете от всички други микроби, които живеят върху гъбата, така че да не замърсят културата ви. След това потопете сърцевината на стъблото в изопропила за около 30 секунди, издърпайте и оставете да изсъхне в стерилното поле на пламъка (не използвайте пламъка, за да го изсушите, това ще убие гъбата). Стерилно стерилизирайте пинсетите си, докато чакате сърцевината на стъблото да изсъхне. След това просто повдигнете капака на една от вашите MEA плочи достатъчно, за да плъзнете пинсетата отстрани, и използвайте стерилизираната пинцета, за да поставите сърцевината на стъблото в центъра на плочата. Запечатайте плочата с парафилм и през следващите няколко седмици трябва да видите S. Commune мицел, колонизиращ плочата.

Обикновено правя няколко чинии, когато работя с диви проби, така че ако все пак се замърся, имам по -голяма вероятност да имам поне една чиста култура.